更新時間: | 2023-06-29 |
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廠商性質(zhì): | 生產(chǎn)廠家 |
提供商: 上海研謹(jǐn)生物服務(wù)名稱: 細(xì)胞生長曲線測定的原理和方法規(guī)格: 細(xì)胞生長曲線的測定 價格: 300元收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)/服務(wù)周期/提供結(jié)果:歡迎咨詢詳談,我們會根據(jù)您的方案及需求制定詳細(xì)的服務(wù)協(xié)議。更多實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)請瀏覽網(wǎng)站其他內(nèi)容,或來電詳詢!
細(xì)胞生長曲線的測定實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>:
掌握繪制細(xì)胞生長曲線的原理和方法。
細(xì)胞生長曲線的測定背景與原理:
生長曲線是測定細(xì)胞生長數(shù)的常用方法,也是判定細(xì)胞活力的重要指標(biāo),是培養(yǎng)細(xì)胞生物學(xué)特性的基本參數(shù)之一。--般細(xì)胞傳代之后,經(jīng)過短暫的懸浮后貼壁,隨后渡過長短不同的潛伏期,即進(jìn)入快速生長的指數(shù)生長期。在細(xì)胞達(dá)到飽和密度后,停止生長,進(jìn)入平臺期,然后退化衰亡。為了準(zhǔn)確描述整個過程中細(xì)胞數(shù)目的動態(tài)變化,需連續(xù)對細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。通常計(jì)數(shù)6天。為準(zhǔn)que起見,一般每次實(shí)驗(yàn)設(shè)3個平行重復(fù)。
[材料、試劑與儀器]
1、實(shí)驗(yàn)材料:
Hela細(xì)胞系。
2、實(shí)驗(yàn)試劑:
DMEM培養(yǎng)基(青霉素,鏈霉素,10%血清) ,0.25%胰蛋白酶溶液, 臺酚藍(lán)染液。
3、實(shí)驗(yàn)儀器:
超凈工作臺,CO2培養(yǎng)箱,倒置顯微鏡,微量移液器,血細(xì)胞計(jì)數(shù)板,培養(yǎng)瓶,離心管,移液管,廢液缸,蓋玻片, 24孔板。
[方法與步驟]
1、取生長良好的細(xì)胞,用培養(yǎng)基制成細(xì)胞懸液后計(jì)數(shù)。根據(jù)細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果按5x104/mL作傳代培養(yǎng)接種于24孔板中,共接種21孔細(xì)胞。1 m/孔。余下三孔可設(shè)傳代培養(yǎng)的對照。
2、24h后每天記錄細(xì)胞數(shù)目,每次取3孔細(xì)胞,分別進(jìn)行計(jì)數(shù)。計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)7d。細(xì)胞用胰酶消化后加入一定量的培養(yǎng)基,混勻制成細(xì)胞懸液。取少量懸液與臺酚藍(lán)1:1混臺。取一干凈的血細(xì)胞計(jì)數(shù)板,蓋上蓋片,從蓋片兩邊滴入細(xì)胞懸液使之充滿計(jì)數(shù)板和蓋片之間。注意滴液勿有氣泡,也不能太多,否則會使蓋片浮起而使細(xì)胞計(jì)數(shù)不準(zhǔn)。
3、低倍鏡下觀察,活細(xì)胞不著色,臺盼藍(lán)著色的細(xì)胞呈深藍(lán)色,是不健康或已死亡的細(xì)胞,不能計(jì)數(shù)。
找出計(jì)數(shù)板上的方格,計(jì)算四角大格內(nèi)總細(xì)胞數(shù),大格線者只計(jì)左側(cè)和上方,不計(jì)右側(cè)和下方細(xì)胞懸液中細(xì)胞
密度計(jì)算公式為:細(xì)胞數(shù)/mL= (四角大格內(nèi)細(xì)胞數(shù)/4) x104x2
4、根據(jù)細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果,以單位細(xì)胞數(shù)(細(xì)胞數(shù)/mL)為縱坐標(biāo),以時間為橫坐標(biāo)繪制生長曲線。
細(xì)胞黏附能力實(shí)驗(yàn)服務(wù)
細(xì)胞熒光染料標(biāo)記檢測實(shí)驗(yàn)
實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):
免疫組化IHC染色實(shí)驗(yàn)服務(wù) | 細(xì)胞、組織TUNEL凋亡染色實(shí)驗(yàn)服務(wù) | 試劑盒免費(fèi)代檢測 | 實(shí)驗(yàn)室代做實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目
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透射電鏡服務(wù)實(shí)驗(yàn)服務(wù) | 石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡 | 核仁組成區(qū)嗜銀-AGNOR染色實(shí)驗(yàn)服務(wù) | 免疫共沉淀(CHIRP)實(shí)驗(yàn) |
RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀(RIP)實(shí)驗(yàn)代做 | 酶聯(lián)免疫(ELISA)技術(shù)服務(wù) | 雞傳染性法氏囊病病毒VP2抗體診斷試劑盒 | 喹諾酮類快速檢測試劑盒 |
組織芯片/微陣列定制技術(shù)服務(wù)
| 染色質(zhì)免疫沉淀分析(CLIP)實(shí)驗(yàn)服務(wù)
| 多因子液相芯片技術(shù)(Luminex)實(shí)驗(yàn) | 免疫細(xì)胞化學(xué)ICC實(shí)驗(yàn)服務(wù) |
ATP/ADP檢測實(shí)驗(yàn)服務(wù) | 蛋白雙向(2-D)電泳實(shí)驗(yàn)服務(wù) | 蛋白相互作用分析 | 堿性磷酸酶染色實(shí)驗(yàn)服務(wù) |
PKC活性檢測實(shí)驗(yàn) | 非標(biāo)定量實(shí)驗(yàn) (Label-free)
| DIGE技術(shù)實(shí)驗(yàn)服務(wù) | 端粒酶活性檢測實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞生長曲線的測定 | 掃描電鏡服務(wù) | NF-KB p65活性檢測實(shí)驗(yàn)
| 慢病毒包裝實(shí)驗(yàn)服務(wù) |