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犬狂犬疫苗抗體酶聯(lián)免疫分析elisa
犬狂犬疫苗抗體酶聯(lián)免疫分析elisa
更新時間:2016-06-28
訪問量: 1051
廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家

犬狂犬疫苗抗體酶聯(lián)免疫分析elisa價格公道、*,售后服務(wù)完整,并提供免費代檢測服務(wù)!
組胺本試劑盒用于測定犬血清,血漿及相關(guān)液體樣本中組胺(Histamine)的含量。

犬狂犬疫苗抗體酶聯(lián)免疫分析elisa產(chǎn)品概述:


                         犬狂犬疫苗抗體酶聯(lián)免疫分析elisa檢測試劑盒
本試劑僅供研究使用              目的:本試劑盒用于測定犬血清,血漿及相關(guān)
液體樣本中犬狂犬疫苗抗體的含量。
實驗原理:
    本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測定標本中犬狂犬疫苗抗體水平。用純化的犬狂犬疫苗抗原
包被微孔板,制成固相抗原,往包被單抗的微孔中依次加入犬狂犬疫苗抗體,再與 HRP 標
記的犬狂犬疫苗抗原結(jié)合,形成抗原-抗體-酶標抗原復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB
顯色。TMB在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深
淺和樣品中的犬狂犬疫苗抗體呈正相關(guān)。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD值),
通過標準曲線計算樣品中犬狂犬疫苗抗體濃度。
試劑盒組成:
試劑盒組成 48孔配置 96孔配置 保存
說明書 1 份 1 份
封板膜 2 片(48) 2 片(96)
密封袋 1 個 1 個
酶標包被板 1×48 1×96 2-8℃保存
標準品:135ng/L 0.5ml×1 瓶 0.5ml×1 瓶 2-8℃保存
標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶 1.5ml×1 瓶 2-8℃保存
酶標試劑 3 ml ×1 瓶 6 ml ×1 瓶 2-8℃保存
樣品稀釋液 3 ml ×1 瓶 6 ml ×1 瓶 2-8℃保存
顯色劑A 液 3 ml ×1 瓶 6 ml ×1 瓶 2-8℃保存
顯色劑B 液 3 ml ×1 瓶 6 ml ×1 瓶 2-8℃保存
終止液 3ml ×1 瓶 6ml ×1 瓶 2-8℃保存
濃縮洗滌液 (20ml×20倍)×1 瓶 (20ml×30倍)×1 瓶 2-8℃保存
樣本處理及要求:
1. 血清:室溫血液自然凝固 10-20 分鐘,離心 20分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上
清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。
2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合 10-20 分鐘后,離心
20分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次
離心。
3. 尿液:用無菌管收集,離心 20分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程
中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心 20分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/
分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS (PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞
濃度達到100 萬/ml 左右。通過反復(fù)凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心 20分
2
鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS ,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)?br />用。標本融化后仍然保持 2-8℃的溫度。加入一定量的 PBS (PH7.4),用手工或勻漿器
將標本勻漿充分。離心 20分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待
檢測,其余冷凍備用。
6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上
進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP )活性。
操作步驟:
1. 標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設(shè)標準品孔 10孔,在*、第二孔中分別加標
準品100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液 50μl,混勻;然后從*孔、第二
孔中各取100μl 分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,
混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 棄掉,再各取 50μl 分別加到第五、第六孔
中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul ,混勻;混勻后從第五、第六孔中各
取50μl 分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液 50μl,混
勻后從第七、第八孔中分別取 50μl 加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準
品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取 50μl 棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,
濃度分別為 90 ng/L,60 ng/L ,30 ng/L,15 ng/L,7.5 ng/L)。
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣
品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品 10μl(樣
品zui終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混
勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育30 分鐘。
4. 配液:將 30(48T 的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30(48T 的20倍)倍稀釋后備用。
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30秒后棄去,如此
重復(fù)5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑 50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同 3。
8. 洗滌:操作同 5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50 μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止
液后15分鐘以內(nèi)進行。
注意事項:
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未
用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間
控制在5 分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4.請每次測定的同時做標準曲線,做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值
大于標準品孔*孔的 OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計
3
算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
10.  如與英文說明書有異,以英文說明書為準。
計算:
以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,      
在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的 OD          
值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋        
倍數(shù);或用標準物的濃度與 OD值計算出標        
準曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD值        
代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋        
倍數(shù),即為樣品的實際濃度。                                
試劑盒性能:
1. 樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù) R 值為0.95 以上。
2. 批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于 9%和11%                                        
保存條件及有效期:
1. 試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6 個月

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