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猴胰島細(xì)胞分離液試劑盒
猴胰島細(xì)胞分離液試劑盒
更新時(shí)間:2023-06-29
訪問量: 1285
廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家

本品用于分離猴胰島細(xì)胞
Store at: RT° C Size :2X100ml/kit試劑盒內(nèi)容
試劑:全血及組織稀釋液 100ml
試劑:細(xì)胞洗滌液 100ml
試劑B: 100ml
試劑D: 100ml
說明書 1份

猴胰島細(xì)胞分離液試劑盒產(chǎn)品概述:

操作說明 細(xì)胞分離液試劑盒操作說明::::

Store at:::RT 試劑盒規(guī)格::::2×100ml/Kit

猴胰島細(xì)胞分離液試劑盒

貨號(hào)                     品牌              產(chǎn)品名稱          規(guī)格         報(bào)價(jià)

干細(xì)胞分離液    
LGS1073TBD人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離液200ml400
LGS1068TBD人外周血造血干細(xì)胞分離液200ml400
LGS1072TBD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離液200ml400
LGS1072WTBD大鼠外周血造血干細(xì)胞分離液200ml400
LGS1081TBD小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離液200ml400
LGS1081WTBD小鼠外周血造血干細(xì)胞分離液200ml400
LGS1090TBD兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離液200ml400
LGS1090WTBD兔外周血造血干細(xì)胞分離液200ml400
LGS1072ZTBD狗骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離液200ml400
LGS1072GWTBD狗外周血造血干細(xì)胞分離液200ml400
LGS1082TBD牛骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離液200ml400
LGS1082WTBD牛外周血造血干細(xì)胞分離液200ml400
LGS1080TBD豚鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離液200ml400
LGS1080WTBD豚鼠外周血造血干細(xì)胞分離液200ml400
LGS1086CTBD雞骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離液100ml400
LGS1086CWTBD雞外周血造血干細(xì)胞分離液100ml400
LGS1074TBD猴骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離液200ml400
LGS1074WTBD猴外周血造血干細(xì)胞分離液200ml400
LGS1106TBD豬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離液100ml400

全血及組織稀釋液 100ml

細(xì)胞洗滌液 100ml

試劑 B 100ml

試劑 D 100ml

說明書 1

一、、、、分離方法說明及圖例

A. 10ml 15ml 玻璃離心管中依次小心加入 B、D 兩種液體各 2ml,制成梯度界面(各液面分層一定要清晰);

B.取 1ml新鮮抗凝血與全血及組織稀釋液(Cat#2010C111911混合并小心加于D液之液面上;或取組織勻漿單細(xì)胞懸液(細(xì)胞濃度為2×108-1×109個(gè)/ml,具體制備方法參照

“二、組織單細(xì)胞懸液的制備”)小心加于D液之液面上;

C. 400g(約1500轉(zhuǎn)/分)離心15分鐘(半徑15cm水平轉(zhuǎn)子);

此時(shí)離心管中由上至下細(xì)胞分為五層。*層;為血漿層或組織勻漿液層。第二層;為

富含胰島細(xì)胞的 D 液層。。。。第三層;為單個(gè)核細(xì)胞層。第四層;為透明 B 液層。第五層;為紅細(xì)胞層。收集第二層富含胰島細(xì)胞的 富含胰島細(xì)胞的 富含胰島細(xì)胞的 D 液層放入含 4-5ml 細(xì)胞洗滌液(Cat#2010X1118)的試管中,充分混勻后,以 500g(約 1800 轉(zhuǎn)/分)離心 20 分鐘,棄去上清留沉淀細(xì)胞重新懸起。重復(fù)洗滌 2 次即得所需胰島細(xì)胞。

注::::A. 提取率約為 80%。

注::::A.. .. 本說明只提供機(jī)械勻漿制備單細(xì)胞懸液的方法 本說明只提供機(jī)械勻漿制備單細(xì)胞懸液的方法 本說明只提供機(jī)械勻漿制備單細(xì)胞懸液的方法,,,,酶消化法由于各實(shí)驗(yàn)室選取的消化 酶消化法由于各實(shí)驗(yàn)室選取的消化酶種類各不相同, 酶種類各不相同,,,請(qǐng)各實(shí)驗(yàn)室自行選擇進(jìn)行試驗(yàn) 請(qǐng)各實(shí)驗(yàn)室自行選擇進(jìn)行試驗(yàn) 請(qǐng)各實(shí)驗(yàn)室自行選擇進(jìn)行試驗(yàn)。。。。全過程及所需試劑要求無菌環(huán)境 全過程及所需試劑要求無菌環(huán)境 全過程及所需試劑要求無菌環(huán)境。。。。 剪碎法::::將組織塊放入平皿后,加入少量組織勻漿液及 20%胎牛血清;用眼科剪將組織剪至勻漿狀,加入 5ml 組織勻漿液及 20%胎牛血清;用吸管吸取組織勻漿,用 100 目不銹鋼濾網(wǎng)

(另購(gòu))過濾到試管內(nèi);離心沉淀 1500轉(zhuǎn)/分×3 min,再用細(xì)胞洗滌液清洗 3次,每次以 500rpm短時(shí)低速離心除去細(xì)胞碎片,以 200 目不銹鋼濾網(wǎng)(另購(gòu))過濾去細(xì)胞團(tuán)塊。作細(xì)胞計(jì)數(shù)并調(diào)整細(xì)胞濃度為(25)×107個(gè)/ml。常溫下放置, 待測(cè)細(xì)胞的活力。分離前用 20%胎牛血清或全血及組織稀釋液懸起細(xì)胞濃度為 2×108-1×109個(gè)/ml 的單細(xì)胞懸液備用。

勻漿器法:用眼科剪將組織剪成小塊;放入 70ml 組織研磨器內(nèi),加入 2ml 組織勻漿液及 20% 勻漿器法胎牛血清;緩慢轉(zhuǎn)動(dòng)研棒,研磨至勻漿;用 5ml 組織勻漿液及 20%胎牛血清沖洗研器;收集細(xì)胞懸液,經(jīng) 200 目不銹鋼濾網(wǎng)(另購(gòu))過濾;離心沉淀 800rpm×2min ,再用細(xì)胞洗滌液洗 3 次,離心沉淀。作細(xì)胞計(jì)數(shù)并調(diào)整細(xì)胞濃度為(25)×107個(gè)/ml。常溫下放置, 待測(cè)細(xì)胞的活力。分離前用 20%胎牛血清或全血及組織稀釋液懸起細(xì)胞濃度為 2×108-1×109 個(gè)/ml 的單細(xì)胞懸液備用。 細(xì)胞計(jì)數(shù)方法: 細(xì)胞計(jì)數(shù)法是用來計(jì)數(shù)細(xì)胞懸液中細(xì)胞數(shù)量的一種方法。一般利用計(jì)數(shù)板(血球計(jì)數(shù)板)進(jìn)行。既可用于分離(散)細(xì)胞培養(yǎng)接種前計(jì)數(shù)所制備的細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)量,也可用于

對(duì)培養(yǎng)物的細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行計(jì)數(shù)。不論計(jì)數(shù)的對(duì)象如何,均須制備分散的細(xì)胞懸液。

1)、在細(xì)胞計(jì)數(shù)板中央放置計(jì)數(shù)的蓋玻片。

2)、用玻璃虹吸管吸取細(xì)胞,讓虹吸管在蓋玻片上或下側(cè)的計(jì)數(shù)板凹蹧處流出懸液,至

蓋玻片被液體充滿為止。

3)、置顯微鏡下計(jì)數(shù)四角大方格內(nèi)的細(xì)胞總數(shù)。對(duì)于壓線的細(xì)胞只計(jì)數(shù)在上線和左線者,

對(duì)于細(xì)胞團(tuán)按單個(gè)細(xì)胞計(jì)數(shù)。

4)、按下式計(jì)數(shù)細(xì)胞懸液的密度:

細(xì)胞密度=(4 個(gè)大格細(xì)胞總數(shù)/4)×104個(gè)/ml×稀釋倍數(shù)

公式中乘以 104因?yàn)橛?jì)數(shù)板中每一個(gè)大格的體積為:

1.0mm(長(zhǎng))×1.0mm(寬)×0.1mm(高)=0.1mm3

  1ml1000mm3

細(xì)胞計(jì)數(shù)要點(diǎn)::::

A 進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí),要求懸液中細(xì)胞數(shù)目不低于 104個(gè)/ml,如果細(xì)胞數(shù)目很少要進(jìn)行離

心再懸浮于少量培養(yǎng)液中;顯微鏡下計(jì)數(shù)時(shí),遇到 2 個(gè)以上細(xì)胞組成的細(xì)胞團(tuán),應(yīng)按單個(gè)細(xì)胞計(jì)算。如果細(xì)胞團(tuán)>10%,說明細(xì)胞分散不充分; 或細(xì)胞數(shù)<200 個(gè)/10mm2>500 個(gè)/10 mm2 時(shí),說明稀釋不當(dāng),需重新制備細(xì)胞懸液。

B 要求細(xì)胞懸液中的細(xì)胞分散良好,否則影響計(jì)數(shù)準(zhǔn)確性。

C 取樣前充分混勻細(xì)胞懸液,尤其多次取樣更要注意每次取樣都要混勻,以求計(jì)數(shù)準(zhǔn)確;

D 數(shù)細(xì)胞的原則是只數(shù)完整的細(xì)胞,若細(xì)胞聚集成團(tuán)時(shí),只按照一個(gè)細(xì)胞計(jì)算。如果細(xì)

胞壓在格線上時(shí),則只計(jì)上線,不計(jì)下線,只計(jì)左線,不計(jì)右線。

E 操作時(shí),注意蓋玻片下不能有氣泡,也不能讓懸液流入旁邊槽中,否則要重新計(jì)數(shù)。

初學(xué)者易犯的錯(cuò)誤: 初學(xué)者易犯的錯(cuò)誤:::

A 計(jì)數(shù)前未將待測(cè)懸液吹打均勻。

B 滴入細(xì)胞懸液時(shí)蓋玻片下出現(xiàn)氣泡。

C 滴入懸液時(shí)的量太多,至使細(xì)胞懸液流入旁邊的槽中。

三、、、、注意事項(xiàng)

A 本分離液是敏光型的,運(yùn)輸和貯藏過程中在 18-25避光保存,啟封后 4保存本品只能用于科學(xué)研究,不能用于臨床檢測(cè)

避免微生物污染。本品為真空包裝,未啟封前于 10 以下易出現(xiàn)白色結(jié)晶,影響分離效果。

B 待分離的血液及組織樣本要求新鮮,避免冷凍和冷藏。分離液和所分離樣本一定在

20水浴箱中復(fù)溫 20 分鐘保證分離液和所分離樣本溫度在 20±2時(shí)分離效果,且

所有操作過程一定要在無菌條件下進(jìn)行。

C 由于各品牌離心機(jī)的性能不同,國(guó)內(nèi)南北地區(qū)溫度環(huán)境和四季差異,可能影響分離

效果,用戶可調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)及離心時(shí)間,摸索*的分離條件(具體分離條件各實(shí)驗(yàn)室自定)。

D 使用無靜電反應(yīng)的離心管,推薦使用未經(jīng)過堿處理的玻璃離心管。

E *抗凝劑選擇:EDTA、枸櫞酸、肝素。注意在血液稀釋過程中應(yīng)去除抗凝劑體積。

F 分離過程中所用其他試劑如:羥乙一基淀粉 550、全血及組織稀釋液、細(xì)胞洗滌液及

紅細(xì)胞裂解液等以我公司產(chǎn)品為*選擇,本公司相關(guān)系列產(chǎn)品無菌、無病毒、無支原體、

低內(nèi)毒素水平且無細(xì)胞毒性,所獲得的細(xì)胞可保持完好的生物活性和完整的細(xì)胞形態(tài)。

四、、、、 產(chǎn)品性能指標(biāo)

pH 7.0-7.5

滲透壓 280-340mOsmol/kg

內(nèi)毒素 0.5...EU/ml

無菌 直接接種培養(yǎng) 14 天后培養(yǎng)基澄清

澄明度及不溶性顆粒物 50ml 溶液中含 10μm 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 20 粒以下含 25μm 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 5 粒以下

五、、、、 貯藏及保存期限 貯藏及保存期限 貯藏及保存期限

18-25避光保存,有效期兩年。啟封后置 4保存,有效期一周。

注::::若保證無微生物污染,啟封后可置 4長(zhǎng)期保存。但應(yīng)注意保存溫度較低時(shí)本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶,影響分離效果。

 

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