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口蹄疫病毒通用型(FMDV-U)核酸檢測試劑盒(熒光 RT-PCR 法) |
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口蹄疫病毒通用型(FMDV-U)核酸檢測試劑盒(熒光 RT-PCR 法) 【產(chǎn)品名稱】 商品名稱：口蹄疫病毒通用型(FMDV-U)核酸檢測試劑盒(熒光 RT-PCR 法) 【包裝規(guī)格】 50T/盒 【貨 號】 XC-2010 【預期用途】 本試劑盒適用于檢測的扁桃體、淋巴結(jié)等組織病變部與健康部交界處組織、全血等標本中口蹄疫病毒 RNA， 適用于口蹄疫病毒感染 的輔助診斷。 【檢驗原理】 本試劑盒采用 TaqMan 探針法實時熒光 RT-PCR 技術(shù)，通過設計 1 對口蹄疫病毒特異性引物，結(jié)合 1 條特異性探針，用熒光 RT-PCR 技術(shù)對口蹄疫病毒核酸進行體外擴增檢測， 用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷。 【試劑組成】 名 稱 規(guī) 格 酶液 50μL×1 管 FMDV-U 反應液 950uL×1 管 FMDV-U 陽性質(zhì)控品 50μL ×1 管 陰性質(zhì)控品 50μL ×1 管 備注：不同批號的試劑盒組分不宜交叉使用。 【儲存條件及有效期】 -20℃±5℃， 避光保存、運輸、反復凍融≤5 次， 有效期 12 個月。 【適用儀器】 ABI 系列 、安捷倫 MX3000P/3005P、Bio-Rad 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。 【標本采集】 病死或撲殺豬，取分泌物、血液、脾臟、扁桃體、腎臟和淋巴結(jié)等 【保存和運輸】 上述標本短期內(nèi)可保存于-20℃， 長期保存可置-70℃，但不能超過 6 個月， 標本運送應采用2~8℃冰袋運輸， 嚴禁反復凍融。 【使用方法】 1. 樣品處理(樣本處理區(qū)) 1.1 樣本前處理 組織樣品： 每份組織分別從 3 個不同的位置稱取樣品約 1g， 手術(shù)剪剪碎混勻后取 0.5g于研磨器中研磨， 加入 1.5mL 生理鹽水后繼續(xù) 研磨，待勻漿后轉(zhuǎn)至 1.5mL 滅菌離心管中， 8000rpm 離心 2min， 取上清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中； 全血樣本：待血凝固后， 取血清 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中。 1.2 RNA 提取 推薦采用深圳市迅測生物科技有限公司生產(chǎn)的 RNA 提取試劑盒(離心柱提取法/磁珠法)，請按照試劑盒說明書進行操作。 2. 試劑配制(試劑準備區(qū)) 根據(jù)待檢測樣本總數(shù)， 設所需要的 PCR 反應管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照，每個測試反應體系配制如下表： 試劑 FMDV-U 反應液 酶液 用量(樣本數(shù)為 N) 19μL 1μL 3. 加樣(樣本處理區(qū)) 將步驟 1 提取的 RNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 5μL， 分別加入相應的反應管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。 4. PCR 擴增(核酸擴增區(qū)) 4.1將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內(nèi)； 4.2設置好通道、樣品信息，反應體系設置為25μL； 熒光通道選擇： 檢測通道選擇 CY5 檢測， 淬滅通道選擇 NONE， 參比熒光選 NONE。 4.3推薦循環(huán)參數(shù)設置： 步驟 循環(huán)數(shù) 溫度 時間 收集熒光信號 1 1 cycle 50℃ 15min 否 2 1 cycle 95℃ 3min 否 3 45cycles 95℃ 15sec 否 55℃ 30sec 是 5. 結(jié)果分析判定 5.1 結(jié)果分析條件設定 設置 Baseline 和 Threshold： 一般直接按機器自動分析的結(jié)果分析，當曲線出現(xiàn)整體傾斜時，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的start 值(一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動閾值線至高于陰性對照)， 重新分析結(jié)果。 5.2 結(jié)果判斷 陽性：檢測通道 Ct 值≤38.0， 且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線。 可疑：檢測通道 Ct 值>38.0， 且出現(xiàn)典型擴增曲線的樣本建議重復試驗，重復試驗結(jié)果出現(xiàn) Ct 值≤38.0 和典型擴增曲線者為陽性， 否則為陰性。 陰性：樣本檢測結(jié)果無 Ct 值且無明顯的擴增曲線。 6. 質(zhì)控標準 陰性質(zhì)控品：無明顯擴增曲線或無 Ct 值顯示； 陽性質(zhì)控品：擴增曲線有明顯指數(shù)生長期， 且 Ct 值≤30； 以上條件應同時滿足， 否則實驗視為無效。 7. 檢測方法的局限性 ? 樣本檢測結(jié)果與樣本收集、處理、運送以及保存質(zhì)量有關(guān)； ? 樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會出現(xiàn)假陽性結(jié)果； ? 陽性對照、擴增產(chǎn)物泄漏， 會導致假陽性結(jié)果； ? 病原體在流行過程中基因突變、重組，會導致假陰性結(jié)果； ? 不同的提取方法存在提取效率差異，會導致假陰性結(jié)果； ? 試劑運輸，保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準確的結(jié)果； ? 本檢測結(jié)果僅供參考， 如須確診請結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段。 【注意事項】 ? 所有操作嚴格按照說明書進行； ? 試劑盒內(nèi)各種組分使用前應自然融化， 完全混勻并短暫離心； ? 反應液應避光保存； ? 反應中管蓋需蓋緊； ? 使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服； ? 樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進行， 以免交叉污染； ? 實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器； ? 試劑盒里所有物品應視為污染物對待，并按照《微生物生物醫(yī)學實驗室生物安全通則》進行處理。 從2011年開始我們致力于在生命科學領(lǐng)域、生物醫(yī)學實驗技術(shù)及論文潤色服務，協(xié)助客戶各類實驗服務及論文潤色十多年，是您值得信賴的科研合作伙伴! 如果您受時間、試驗條件等限制而無法完成您的課題研究，歡迎您與我們聯(lián)系。
實驗技術(shù)服務：
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