兔外周血單個核細(xì)胞分離液試劑盒說明書
【產(chǎn)品規(guī)格】
200ml/Kit
【產(chǎn)品組成】
為方便廣大用戶使用,試劑內(nèi)容如下:
| 名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 |
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A | XXXX 動物外周血單個核細(xì)胞分離液 |
| 200ml |
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B | 樣本稀釋液(贈品) | 2010C1119 | 200ml |
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C | 清洗液(贈品) | 2010X1118 | 200ml |
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D | 說明書 |
| 1 份 |
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【實驗前準(zhǔn)備】
A. 適用儀器
zui大離心力可達(dá) 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)
B. 耗材
| 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品貨號 | 產(chǎn)地 |
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| 15ml 離心管散裝 | 339650 | 美國 NUNC |
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| 15ml 離心管架裝 | 339651 | 美國 NUNC |
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| 50ml 離心管散裝 | 339652 | 美國 NUNC |
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| 50ml 離心管架裝 | 339653 | 美國 NUNC |
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| 無菌膠頭滴管或塑料滴管 |
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【檢驗方法】 |
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全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。
首先取抗凝血按體積比 1:1 的比例加入樣本稀釋液(產(chǎn)品編號:2010C1119)混勻,根
據(jù)稀釋后的樣本量大小,分以下兩種情況:
情況 A:稀釋后的血液樣本量小于 5ml 時,實驗方法如下:
情況 B:稀釋后的血液樣本量大于等于 5ml 時,實驗方法如下:
【注意事項】
粒細(xì)胞數(shù)量增加。
【儲存條件及有效期】
18-25℃保存,有效期 2 年。本品易感染細(xì)菌,需無菌條件操作。無菌條件下操作,啟
封后置常溫保存。如 4℃保存,本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶,影響分離效果。
【參考值(參考范圍)】
本實驗單個核細(xì)胞提取率及純度均大于 80%。
下表為成年人外周血中各種細(xì)胞的數(shù)量及比例,用戶可適當(dāng)進(jìn)行參考。
| 紅細(xì)胞 |
| 白細(xì)胞 |
| 血小板 |
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| (4.0-10.0)×109 |
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含量(個/L) | (4.0-5.5)×1012 | 中性粒細(xì)胞 | 淋巴細(xì)胞 | 單核細(xì)胞 | (1.0-3.0)×1011 |
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| 50%-70% | 20%-40% | 3%-8% |
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【相關(guān)實驗技術(shù)方案】
C.原位雜交技術(shù)
D.PCR 技術(shù)
注:上述技術(shù)方案詳情請登陸本搜索“細(xì)胞分離、
純化、擴(kuò)增、鑒定及生物治療技術(shù)手冊”,并在說明書項目欄下下載使用。
【可能存在的問題及解決方法】
1. 由于血液粘度、細(xì)胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示:
出現(xiàn)情況 | 出現(xiàn)原因 | 建議解決方案 | |
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離心后目的細(xì)胞存在于血漿層或稀釋液層 | 轉(zhuǎn)速過小或離心時間過短 | 適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速 | |
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離心后目的細(xì)胞存在于分離液中 | 轉(zhuǎn)速過大或離心時間過長 | ||
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離心后白環(huán)層彌散 | 細(xì)胞密度過大 | 調(diào)整細(xì)胞密度 | |
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離心后白環(huán)層太淺或看不見 | 細(xì)胞密度過小 | ||
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能出現(xiàn)紅細(xì)胞沉降不*的情況,可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速。
注:在對離心條件進(jìn)行調(diào)整時,離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù),直至達(dá)到分離效果,
離心力zui小不得小于 400g,zui大不得大于 1200g。離心時間以 20-30min 為準(zhǔn)。