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兔外周血單個核細(xì)胞分離液試劑盒說明書
點(diǎn)擊次數(shù):1210 更新時間:2016-01-19

 

 

兔外周血單個核細(xì)胞分離液試劑盒說明書

 

【產(chǎn)品規(guī)格】

 

200ml/Kit

 

【產(chǎn)品組成】

 

為方便廣大用戶使用,試劑內(nèi)容如下:

 

 

名稱

產(chǎn)品編號

規(guī)格

 

 

 

 

A

XXXX 動物外周血單個核細(xì)胞分離液

 

200ml

 

 

 

 

B

樣本稀釋液(贈品)

2010C1119

200ml

 

 

 

 

C

清洗液(贈品)

2010X1118

200ml

 

 

 

 

D

說明書

 

1

 

 

 

 

【實驗前準(zhǔn)備】

 

A 適用儀器

 

zui大離心力可達(dá) 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)

 

B 耗材

 

 

產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品貨號

產(chǎn)地

 

 

 

 

 

15ml 離心管散裝

339650

美國 NUNC

 

 

 

 

 

15ml 離心管架裝

339651

美國 NUNC

 

 

 

 

 

50ml 離心管散裝

339652

美國 NUNC

 

 

 

 

 

50ml 離心管架裝

339653

美國 NUNC

 

 

 

 

 

無菌膠頭滴管或塑料滴管

 

 

 

 

 

 

【檢驗方法】

 

 

 

全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2的條件下進(jìn)行。

 

首先取抗凝血按體積比 1:1 的比例加入樣本稀釋液(產(chǎn)品編號:2010C1119)混勻,根

 

據(jù)稀釋后的樣本量大小,分以下兩種情況:

 

情況 A:稀釋后的血液樣本量小于 5ml 時,實驗方法如下:

 

  1. 取一支 15ml 離心管,先加入與稀釋后樣本等量的分離液(注:分離液zui少不得少于 3ml)。

 

  1. 用吸管小心吸取稀釋后的血液樣本加于分離液液面上,400-500g ,離心 20-30min(注: 根據(jù)血液樣本量確定離心條件,血液樣本量越多,離心力越大,離心時間越長,具體離 心條件需客戶自行摸索,以達(dá)到分離效果)。

 

  1. 離心后,此時離心管中由上至下分為四層。*層為血漿層。第二層為環(huán)狀乳白色單個 核細(xì)胞層。第三層為透明分離液層。第四層為紅細(xì)胞層。

 

  1. 用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色單個核細(xì)胞層到另一 15ml 離心管中,在離心管中加 入 10ml 清洗液(產(chǎn)品編號:2010X1118),混勻細(xì)胞。

 

  1. 250g,離心 10min。

 

  1. 棄上清。

 

  1. 用吸管以 5ml 清洗液(產(chǎn)品編號:2010X1118)重懸所得細(xì)胞。

 

  1. 250g,離心 10min。

 

  1. 重復(fù) 67、8,棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實驗所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞。

 

情況 B:稀釋后的血液樣本量大于等于 5ml 時,實驗方法如下:

 

  1. 取一支適當(dāng)?shù)碾x心管,先加入與稀釋后樣本等量的分離液。

 

  1. 將經(jīng)稀釋后的血液樣本小心加于分離液之液面上,500-650g(zui大離心力可至 1000g), 離心 20-30min。(注:根據(jù)血液樣本量確定離心條件,血液量越多,離心力越大,離心 時間越長,具體離心條件需客戶自行摸索,以達(dá)到分離效果。加入血液樣本后,樣 本及分離液總體積不得超過離心管總體積的三分之二)。

 

  1. 剩余步驟同情況 A”中步驟 3 至步驟 9。

 

【注意事項】

 

  1. 全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2的條件下進(jìn)行。為獲得的實驗結(jié)果,zui 好在取血 2h 內(nèi)進(jìn)行實驗,血液存放時間越長,細(xì)胞分離效果越差。血液放置超過 6h 后 分離效果更差甚至不能達(dá)到分離目的。

 

  1. 本實驗不要使用高聚合材質(zhì)(如聚苯乙烯)的塑料制品,應(yīng)使用無靜電、低靜電離 心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品,因為靜電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁、堿處理的玻璃表面 會變成毛面,影響細(xì)胞分離效果。

 

  1. 吸取過多的單個核細(xì)胞層及分離液層會導(dǎo)致分離液交界處的粒細(xì)胞被吸出從而使混雜的

 

粒細(xì)胞數(shù)量增加。

 

  1. 吸取過多的單個核細(xì)胞層上層溶液會導(dǎo)致血漿蛋白及血小板混雜。

 

  1. 分離液用量大于稀釋后血液樣本時,分離效果更佳。

 

  1. 如實驗后細(xì)胞得率或活性過低,請以尋求幫助,具體詳 見下方生產(chǎn)企業(yè)信息。

 

【儲存條件及有效期】

 

 

18-25保存,有效期 2 年。本品易感染細(xì)菌,需無菌條件操作。無菌條件下操作,啟

 

封后置常溫保存。如 4保存,本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶,影響分離效果。

 

【參考值(參考范圍)】

 

本實驗單個核細(xì)胞提取率及純度均大于 80%。

 

下表為成年人外周血中各種細(xì)胞的數(shù)量及比例,用戶可適當(dāng)進(jìn)行參考。

 

 

紅細(xì)胞

 

白細(xì)胞

 

血小板

 

 

 

 

 

 

 

 

4.0-10.0)×109

 

含量(個/L

4.0-5.5)×1012

中性粒細(xì)胞

淋巴細(xì)胞

單核細(xì)胞

1.0-3.0)×1011

 

 

50%-70%

20%-40%

3%-8%

 

 

 

 

 

 

 

 

【相關(guān)實驗技術(shù)方案】

 

  1. 所獲得單個核細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)。

 

  1. 所獲得單個核細(xì)胞的核酸提取技術(shù)。

 

  1. 所獲得單個核細(xì)胞的鑒定方法 A.流式細(xì)胞技術(shù) B.免疫組化技術(shù)

 

C.原位雜交技術(shù)

 

D.PCR 技術(shù)

 

注:上述技術(shù)方案詳情請登陸本搜索細(xì)胞分離、

 

純化、擴(kuò)增、鑒定及生物治療技術(shù)手冊,并在說明書項目欄下下載使用。

 

【可能存在的問題及解決方法】

 

1.    由于血液粘度、細(xì)胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示:

 

出現(xiàn)情況

出現(xiàn)原因

建議解決方案

 

 

 

 

 

離心后目的細(xì)胞存在于血漿層或稀釋液層

轉(zhuǎn)速過小或離心時間過短

適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速

 

 

 

 

離心后目的細(xì)胞存在于分離液中

轉(zhuǎn)速過大或離心時間過長

 

 

 

 

 

 

 

離心后白環(huán)層彌散

細(xì)胞密度過大

調(diào)整細(xì)胞密度

 

 

 

 

離心后白環(huán)層太淺或看不見

細(xì)胞密度過小

 

 

 

 

 

 

 

 

  1. 本分離液分離細(xì)胞的原理為密度梯度離心,其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)。不同地 區(qū)客戶可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r對離心條件進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。建議對離心條件進(jìn)行調(diào)整時,恒定離 心時間,對離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行調(diào)整。

 

  1. 本分離液依照標(biāo)準(zhǔn),全部使用藥用級原料,性能指標(biāo)與國產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同,可

 

 

能出現(xiàn)紅細(xì)胞沉降不*的情況,可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速。

 

注:在對離心條件進(jìn)行調(diào)整時,離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù),直至達(dá)到分離效果,

 

離心力zui小不得小于 400g,zui大不得大于 1200g。離心時間以 20-30min 為準(zhǔn)。

 

 

滬公網(wǎng)安備 31011802001676號

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