蔗糖合成酶（Sucrose synthase，SS）試劑盒說明書

微量法

正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義

蔗糖是源（葉片等）光合產(chǎn)物向“庫"器官運輸?shù)闹饕螒B(tài)。SS（EC 2.4.1.13）催化植物體內(nèi)游離果糖和葡萄糖合成蔗糖。

測定原理

SS催化游離果糖與葡萄糖供體UDPG反應(yīng)生成蔗糖，蔗糖與間苯二酚反應(yīng)可呈現(xiàn)顏色變化，在480nm下有特征吸收峰，酶活力大小與顏色的深淺成正比。

需自備的儀器和用品

可見分光光度計/酶標(biāo)儀、水浴鍋、離心機(jī)、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰

試劑的組成和配制

提取液：液體 50mL×1 瓶，4℃保存；

試劑一：液體 2.5mL×1 瓶，-20℃保存；

試劑二：1000μg/mL 蔗糖溶液 10mL×1 瓶，4℃保存；

試劑三：液體 2mL×1 瓶，4℃保存

試劑四：液體 25mL×1 瓶，4℃保存；

試劑五：液體 6mL×1 瓶，4℃保存；

樣品測定的準(zhǔn)備：

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟

1、分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至480nm，蒸餾水調(diào)零。

2、樣本測定，（在EP管中依次加入下列試劑）：

混勻，沸水浴30min，冷卻后，取200μL至微量石英比色皿或96孔板中，480nm下測定各管吸光值。標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只要做一管。每個測定管需要設(shè)一個對照管。

SS 活性計算

1、按照蛋白濃度計算

單位定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1μg蔗糖定義為一個酶活力單位。

SS 活性(μg/min/mg prot)= {C 標(biāo)準(zhǔn)管×V1×（A 測定管-A 對照管)÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）÷(V1×Cpr)÷T=100×（A 測定管-A 對照管)÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)÷Cpr

2、按照樣本鮮重計算

單位定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1μg蔗糖定義為一個酶活力單位。

SS 活性(μg/min/g 鮮重) = {C 標(biāo)準(zhǔn)管×V1×（A 測定管-A 對照管)÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）÷(W×V1÷V2)÷T=100×（A 測定管-A 對照管)÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)÷W

C 標(biāo)準(zhǔn)管：標(biāo)準(zhǔn)管濃度，1000μg/mL；V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.01mL； V2：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g；T ：反應(yīng)時間：10min。

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