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huh-7 人肝癌細(xì)胞傳代復(fù)蘇參考
點(diǎn)擊次數(shù):549 更新時(shí)間:2023-03-23

huh-7 人肝癌細(xì)胞

Human Hepatocellular Carcinoma Cells ,huh7

貨號:YJ-h080(STR鑒定)

價(jià)格: 1500.0

規(guī)格: 1*106

細(xì)胞介紹

此細(xì)胞產(chǎn)甲胎蛋白,胰酶α抗體,血漿銅藍(lán)蛋白,纖維蛋白原,纖維粘連蛋白等。

細(xì)胞特性

1 來源:肝

2 形態(tài):上皮細(xì)胞樣,貼璧生長

3 含量:>1x10^6  細(xì)胞數(shù)

4 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途:僅供科研使用。

運(yùn)輸和保存

干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

11mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。

2T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

細(xì)胞接收后的處理:

1)收到細(xì)胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

2)請?jiān)?/span>45X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3)貼壁細(xì)胞:細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況,有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會因振動脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL,放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上,可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中,若因運(yùn)輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收。

4備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶12傳代 。

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1 準(zhǔn)備DMEM(含NaHCO3 1.5g/L推薦YJ-128-0001)或者GIBCO,貨號12800017,添加NaHCO3 1.5g/L)培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%

2 注意:該細(xì)胞在DMEM(1.5g/LNaHCO3)培養(yǎng)基中生長良好,大部分品牌的DMEM含有較高濃度的NaHCO33.7g/L),若使用DMEM3.7g/L NaHCO3)培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)需要提高CO2濃度(7%-10%

3 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

4 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。

二.細(xì)胞處理:

1 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇:

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

huh-7 人肝癌細(xì)胞_副本.png


對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T251-2mL,T752-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時(shí)間),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。 

3.輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按12的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3)細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

下面T25瓶為例;

1. 細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10^6~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ,按每1ml凍存液含1×10^6~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3. 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

 

注意事項(xiàng)

1.收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。

2.收到細(xì)胞先不開瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)(視細(xì)胞密度而定)穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收細(xì)胞時(shí)就整體外觀拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài),100*,200*各一張),觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷售依據(jù)。

3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊?,故本公司只保證客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài),故客戶需要售后時(shí)需出示收到細(xì)胞的時(shí)間證明及客戶提供收貨時(shí)間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時(shí)間證明,期間間隔時(shí)間不能大于7天。

4.所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

5.客戶在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,有任何技術(shù)問題可聯(lián)系技術(shù)售后,我們隨時(shí)給予解答。

2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)外包及論文潤色服務(wù),協(xié)助客戶各類實(shí)驗(yàn)服務(wù)及論文潤色十多年,是您值得信賴的科研合作伙伴!

如果您受時(shí)間、試驗(yàn)條件等限制而無法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。

 

實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):

 


滬公網(wǎng)安備 31011802001676號

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