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呋喃西林檢測試劑盒(檢組織、雞蛋)
點擊次數(shù):836 更新時間:2022-07-28

呋喃西林代謝物

快速檢測試劑盒說明書

一、原理

本試劑盒采用間接競爭ELISA方法,在微孔條上預包被偶聯(lián)抗原,樣本中的殘留物呋喃西林代謝物將和微孔條上預包被的偶聯(lián)抗原競爭抗呋喃西林代謝物抗體,加入酶標記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光值與其所含殘留物呋喃西林代謝物的含量成負相關,與標準曲線比較即可得出相應殘留物呋喃西林代謝物的含量。

二、試劑盒特性

試劑盒靈敏度:   0.02ppb

孵育溫度:       25

孵育時間:       30min~15min

樣本檢測下限

肌肉組織   ·································  0.1ppb

雞蛋    ·······································  0.1ppb

交叉反應率

呋喃西林代謝物 ·································  100%

呋喃唑酮代謝物 ·······························  0.1%

呋喃妥因代謝物 ·······························  0.1%

呋喃它酮代謝物 ·······························  0.1%

樣本回收率

肌肉組織   ·································  95%±25%

雞蛋    ······································  9525%

三、試劑盒組成

1

微量測試孔

每條8孔,一板12

2

標準液×6

1ml/瓶)

0ppb

0.02ppb

0.06ppb

0.18ppb

0.54ppb

1.62ppb

3

酶標記物

7ml

紅色帽

4

抗體工作液

7ml

藍色帽

5

底物A

7ml

白色帽

6

底物B

7ml

黑色帽

7

終止液

7ml

黃色帽

8

20X濃縮洗滌液

40ml

白色帽

9

2X濃縮復溶液

50ml

透明帽

10

衍生化試劑

10ml

四、所用儀器、試劑

具備的儀器:酶標儀、均質(zhì)器、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平(感量0.01g)、氮吹儀、恒溫箱、恒溫水浴鍋

微量移液器:單道 20~200µl、單道100~1000µl、多道 30~300 µl

     劑:氫氧化鈉、K2HPO4·3H2O、正己烷、乙酸乙酯、濃HCl

五、樣本前處理步驟

樣本處理前須知

a)實驗中必須使用一次性吸頭,吸取不同試劑時要更換吸頭。

b)實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈,必要時可對實驗器具進行清潔,以避免污染干擾實驗結(jié)果。

樣本前處理需配制

配液1  0.1M K2HPO4溶液:

11.4g K2HPO4·3H2O加去離子水溶解定溶至500ml。

配液2  1M HCl 溶液:

8.6mlHCl加去離子水定容至100ml

配液3  1M NaOH溶液:

4g NaOH加去離子水定容至100ml

配液4  樣本復溶液:

2X濃縮復溶液用去離子水按11稀釋。

樣本處理

a)肌肉、雞蛋樣本處理方法

1±0.05g的均質(zhì)物,分別加入4ml的蒸餾水,0.5ml 1M HCl溶液100µl衍生化試劑,充分振蕩2min;

37過夜孵育(大約16h)或56水浴中孵育(2h)

分別加入5ml 0.1M K2HPO4溶液,0.4ml 1M NaOH溶液6ml乙酸乙酯,充分振蕩30s

在室溫下(20-254000r/min以上離心10min如出現(xiàn)乳化現(xiàn)象或乙酸乙酯層不足 3ml ,在 80  水浴孵育樣品10min 并重復離心;或提高轉(zhuǎn)速延長離心時間重復離心);

取出3ml的乙酸乙酯到另一個容器中于50氮氣/空氣吹干。

2ml正己烷溶解干燥物,再加入1ml樣本復溶液充分混合30s;在室溫下4000r/min以上離心10min;去除上層正己烷相(如出現(xiàn)乳化現(xiàn)象,則去除上層正己烷后于70水浴10-20min,重復離心);

50µl下層用于分析。

樣本稀釋倍數(shù):  2

b皮、肥膘等脂肪組織樣本處理方法

1、 1±0.05g的均質(zhì)物,加入10ml正己烷充分振蕩2min

2、 室溫下(20-254000r/min以上離心10min,倒出全部正己烷;

3、 加入4ml的蒸餾水,0.5ml 1M HCl溶液100µl衍生化試劑,充分振蕩2min;

4、 37過夜孵育(大約16h)或56水浴中孵育(2h);

5、 分別加入5ml 0.1M K2HPO4溶液,0.4ml 1M NaOH溶液6ml乙酸乙酯,充分振蕩30s;

6、 室溫下(20-254000r/min以上離心10min;

7、 3ml的乙酸乙酯到另一個容器中于50氮氣/空氣吹干;

8、 2ml正己烷溶解干燥物,再加入1ml樣本復溶液充分混合30s;在室溫下4000r/min以上離心10min;去除上層正己烷相;

9、 50µl下層用于分析。

    樣本稀釋倍數(shù):  2

六、 酶標免疫分析程序:

測定前應須知:

1、 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫(2025)。

2、 使用之后立即將所有試劑放回28。

3、 ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的一致性,正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點。

4、 所有恒溫孵育過程,避免光線照射,用蓋板膜蓋住微孔板。

操作步驟:

1、 28冷藏環(huán)境中取出所需試劑,室溫(2025)平衡30min以上,注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

2、 取出框架及需要數(shù)量的微孔,將不用的微孔放入自封袋,保存于2-8。

3、 配液:將40ml濃縮洗滌液(20倍濃縮)用去離子水按照119稀釋(1份濃縮洗滌液+19份去離子水),或按所需用量配制洗滌液。

4、 編號:將樣本和標準品對應微孔按序編號,每個樣本和標準品做2孔平行,并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。

5、 加標準品/樣品50µl/孔到各自的微孔中,加入酶標記物50µl/孔,然后再加入抗體工作液50µl/孔,用蓋板膜封板,25環(huán)境中反應30min

6、 將孔內(nèi)液體甩干,用已稀釋的洗滌液250µl/孔洗板45次,每次間隔1530秒,用吸水紙拍干(拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。

7、 顯色:加入底物A50µl/孔,再加入底物B50µl/孔,輕輕振蕩混勻,25環(huán)境中避光顯色15min。

8、 測定:加入終止液50µl/孔,輕輕振蕩混勻,設定酶標儀于450nm處(建議用雙波長450/630nm檢測,5min內(nèi)讀數(shù)),測定每孔OD值。

七、結(jié)果判定

結(jié)果判定有兩種方法,粗略判定可用第1種方法,定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含呋喃西林代謝物量成負相關。

1、粗略判定:

用樣本的平均吸光度值與標準值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設樣本1的吸光度值為0.3,樣本2的吸光度值為1.0,標準液吸光度值分別是:0ppb2.2430.02ppb1.816;0.06ppb1.415;0.18ppb0.74;0.54ppb0.313;1.62ppb0.155。則樣本1的濃度范圍是0.54ppb1.62ppb;樣本2的濃度范圍是0.06ppb0.18ppb,乘以其對應的稀釋倍數(shù)即為樣本中呋喃西林代謝物實際濃度。

2、定量分析

1)百分吸光率的計算,標準品或樣本的百分吸光率等于標準品或樣本的吸光度值的平均值(雙孔)除以第一個標準(0標準)的吸光度值,再乘以100%,即

百分吸光%)=

B

×100%

B0

B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值

B0—0ng/ml標準溶液的平均吸光度值

2)標準曲線的繪制與計算

以標準品百分吸光率為縱坐標,以呋喃西林代謝物標準品濃ng/ml)的半對數(shù)為橫坐標,繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中,從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度,乘以其對應的稀釋倍數(shù)即為樣本中呋喃西林代謝物實際濃度。

若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進行計算,更便于大量樣本的準確、快速分析。(歡迎來電索?。?/span>

八、 注意事項

1、 室溫低于25或試劑及標本未回到室溫(2025)會導致所有標準的OD值偏低。

2、 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會伴隨著標準曲線不成線性,重復性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應立即進行下一步操作。

3、 混合要均勻,否則會出現(xiàn)重復性不好的現(xiàn)象。

4、 反應終止液為2M硫酸,避免接觸皮膚。

5、 不要使用過了有效日期的試劑盒;稀釋或攙雜使用會引起靈敏度、OD值變化;不要交換使用不同批號的盒中試劑。

6、 不用的微孔板放進自封袋重新密封;標準物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感,因此要避免直接暴露在光線下。

7、 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應當棄之。標準品1的吸光度值小于0.5時,表示試劑可能變質(zhì)。

8、 該試劑盒最佳反應溫度為25,溫度過高或過低將導致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

九、儲藏條件和保質(zhì)期

1、 儲藏條件:試劑盒于28保存,不要冷凍。

2、  質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見包裝盒。

提示:酶標板真空包裝袋若有漏氣,酶標板仍然正常有效,不影響實驗結(jié)果,請放心使用。

 

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