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呋喃西林殘留(肌肉組織、雞蛋樣本處理方法)
點(diǎn)擊次數(shù):1709 更新時(shí)間:2021-09-26


2018-01 

呋喃西林代謝物  快速檢測試劑盒說明書

一、原理

本試劑盒采用間接競爭ELISA 方法,在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原,樣本中的殘留物呋喃西林代謝物將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭抗呋喃西林代謝物抗體,加入酶標(biāo)記物后,用 TMB 底物顯色, 樣本吸光值與其所含殘留物呋喃西林代謝物的含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物呋喃西林代謝物的含量。

二、試劑盒特性

試劑盒靈敏度: 0.02ppb

孵育溫度: 25

孵育時(shí)間: 30min~15min

樣本檢測下限

  ·······································   0.1ppb

  ·······································   0.1ppb

交叉反應(yīng)率

西林謝物 100%

唑酮謝物 0.1%

妥因謝物 0.1%


提示:酶標(biāo)板真空包裝袋若有漏氣,酶標(biāo)板仍然正常有效,不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,請放心使用。

5

底物A

7ml

白色帽

6

底物B

7ml

黑色帽

7

終止液

7ml

黃色帽

8

20X 濃縮洗滌液

40ml

白色帽

9

2X 濃縮復(fù)溶液

50ml

透明帽

10

衍生化試劑

10ml

黑色帽

 


四、所用儀器、試劑

具備的儀器:酶標(biāo)儀、均質(zhì)器、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平感量 0.01g、氮吹儀、恒溫箱、恒溫水浴鍋

微量移液器:單道 20~200µl、單道 100~1000µl、多道 30~300 µl

氫氧、K2HPO4·3H2O、己烷、乙酯、 HCl

五、樣本前處理步驟

樣本處理前須知

(a) 實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭,吸取不同試劑時(shí)要更換吸頭。

(b) 實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈, 必要時(shí)可對實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔,以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

樣本前處理需配制

配液 1 0.1M K HPO 溶液:

2、 70℃水浴鍋中孵育 20min;

3、 分別加入 5ml 0.1M K2HPO4 溶液,0.4ml 1M NaOH 溶液和 6ml 乙酸乙酯,充分振蕩 30s;

4、 在室溫下(20-25℃)4000r/min 以上離心 10min

如出現(xiàn)乳化現(xiàn)象或乙酸乙酯層不足   3ml        ,在80      ℃  水浴孵育樣品10min      并重復(fù)離心;或提高轉(zhuǎn)速和延長離心時(shí)間重復(fù)離心);

5、 取出 3ml 的乙酸乙酯到另一個(gè)容器中于 50℃氮?dú)?/span>/空氣吹干。

6、 2ml 正己烷溶解干燥物,再加入 1ml 樣本復(fù)溶液充分混合 30s;在室溫下 4000r/min 以上離心    10min;去除上層正己烷相如出現(xiàn)乳化現(xiàn)象,則去除上層正己烷后于70℃水浴10-20min,       重復(fù)離心;

7、 50µl 下層用于分析。

樣本稀釋倍數(shù): 2

此方法與呋喃唑酮代謝物、呋喃它酮代謝物、         呋喃妥因代謝物、氯霉素試劑盒可合一處理。

六、 酶標(biāo)免疫分析程序:

測定前應(yīng)須知:

1 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫

2025℃)。

2 使用之后立即將所有試劑放回 28℃。

3、 ELISA 分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的一致性,正確的洗板操作是 ELISA 測定

個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做 2 孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。

5、 加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品 50µl/孔到各自的微孔中,加入酶標(biāo)記物 50µl/孔,然后再加入抗體工作液 50µl/ 孔,用蓋板膜封板,25℃環(huán)境中反應(yīng) 30min

6、 將孔內(nèi)液體甩干,用已稀釋的洗滌液 250µl/洗板 45 次,每次間隔 1530 秒,用吸水紙拍干拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。

7 顯色:加入底物A 50µl/孔,再加入底物 B 50µl/孔,輕輕振蕩混勻,25℃環(huán)境中避光顯 15min。

8、 測定:加入終止液 50µl/孔,輕輕振蕩混勻,設(shè)定酶標(biāo)儀于 450nm 建議用雙波長 450/630n m 檢測,5min 內(nèi)讀數(shù),測定每孔 OD 值。

七、結(jié)果判定

結(jié)果判定有兩種方法,粗略判定可用第 1 種方

法,定量判定用第 2 種方法。注意樣本吸光度值與其所含呋喃西林代謝物量成負(fù)相關(guān)。

1、粗略判定:

用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本 1 的吸光度值為 0.3, 樣本 2 的吸光度值為 1.0,標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是: 0ppb  2.243;0.02ppb  1.8160.06ppb  1.415;

0.18ppb  0.740.54ppb  0.313;1.62ppb  0.155

2 4 程序中的要點(diǎn)。則樣本 1 的濃度范圍是 0.54ppb1.62ppb;樣本 2


呋喃它 0.1%

樣本回收率

  95%±25%

  95%±25%

三、試劑盒組成

11.4g K2HPO4·3H2O 加去離子水溶解定溶至 500ml。

配液 2 1M HCl 溶液:

8.6ml HCl 加去離子水定容至 100ml。配液 3 1M NaOH 溶液:

4g NaOH 加去離子水定容至 100ml

配液 4 樣本復(fù)溶液:

 2X 濃縮復(fù)溶液用去離子水按 11 稀釋。

樣本處理

4、 所有恒溫孵育過程,避免光線照射,用蓋板膜蓋住微孔板。

操作步驟:

1、 28℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑,室溫20

25℃)平衡 30min 以上,注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

2、 取出框架及需要數(shù)量的微孔,將不用的微孔放入自封袋,保存于 2-8℃。


的濃度范圍是 0.06ppb0.18ppb,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中呋喃西林代謝物實(shí)際濃度。

2、定量分析

1百分吸光率的計(jì)算,標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的吸光度值的平均值(雙孔除以第一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)0 標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值,再乘 100%,即

B



 

肌肉組織、雞蛋樣本處理方法

3、 配液:將 40ml 濃縮洗滌液(20 倍濃縮)用去

離子水按照 119 稀釋(1 份濃縮洗滌液+19

百分吸光率(%)=

×100%

B0

1、 稱取 1±0.05g 的均質(zhì)物,分別加入 4ml 的蒸餾水,0.5ml 1M HCl 溶液和 100µl 衍生化試劑, 充分振蕩 2min;

去離子水),或按所需用量配制洗滌液。

4、 編號:將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號,每B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值B0—0ng/ml 標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算



以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo),以呋喃西林代謝物標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ng/ml)的半對數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中, 從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中呋喃西林代謝物實(shí)際濃度。

若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。


八、 注意事項(xiàng)

1、 室溫低于 25℃或試劑及標(biāo)本未回到室溫(20~

25℃)會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的 OD 值偏低。

2、 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會(huì)伴隨著標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。

3、 混合要均勻,否則會(huì)出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。

4、 反應(yīng)終止液為 2M 硫酸,避免接觸皮膚。

5、 不要使用過了有效日期的試劑盒;稀釋或攙雜使用會(huì)引起靈敏度、OD 值變化;不要交換使用不同批號的盒中試劑。

6、 不用的微孔板放進(jìn)自封袋重新密封;標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感,因此要避免直接暴露在光線下。

7、 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。標(biāo)準(zhǔn)品 1 的吸光度值小于 0.5 時(shí),表示試劑可能變質(zhì)。

8、 該試劑盒最佳反應(yīng)溫度為 25℃,溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

九、儲藏條件和保質(zhì)期

1、 儲藏條件:試劑盒于 2~8℃保存,不要冷凍。

2、 保 質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為 1 年,生產(chǎn)日期見包裝盒。

提示:酶標(biāo)板真空包裝袋若有漏氣,酶標(biāo)板仍然正常有效,不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,請放心使用。

九、儲藏條件和保質(zhì)期

1 儲藏條件:試劑盒于 28℃保存,不要冷凍。


滬公網(wǎng)安備 31011802001676號

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