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氟苯尼考檢測組織、蜂蜜、奶制品試劑盒
點(diǎn)擊次數(shù):857 更新時間:2021-07-26

            氟苯尼考

快速檢測試劑盒說明書

一、原理

本試劑盒采用間接競爭ELISA方法,在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原,樣本中的殘留物氟苯尼考將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭抗氟苯尼考抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光值與其所含殘留物氟苯尼考的含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物氟苯尼考的含量。

二、試劑盒特性

試劑盒靈敏度:   0.1ppb

孵育溫度:       25℃

孵育時間:       30min15min

樣本檢測下限

···············································  0.1ppb

················································  5 ppb

···············································  0.2ppb

交叉反應(yīng)率

氟苯尼考·     ····································· 100%

甲砜霉素   ········································ < 0.1%

氟苯尼考胺  ······································  11%

氯霉素  ············································ < 0.1%

樣本回收率

 、蜂 蜜、牛  ······················  90%±30%

三、試劑盒組成

1

微量測試孔

每條8孔,一板12

2

標(biāo)準(zhǔn)液×6

1ml/瓶)

0ppb

0.1ppb

0.2ppb

0.4ppb

0.8ppb

1.6ppb

3

酶標(biāo)記物

7ml

紅色帽

4

抗體工作液

7ml

藍(lán)色帽

5

底物A

7ml

白色帽

6

底物B

7ml

黑色帽

7

終止液

7ml

黃色帽

8

20X濃縮洗滌液

15ml

白色帽

9

20X濃縮提取液

50ml*2

透明帽

四、所用儀器、試劑

具備的儀器:酶標(biāo)儀、均質(zhì)器、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平(感量0.01g)、氮吹儀、恒溫箱

微量移液器:單道 20200µl、單道1001000µl、多道 30300 µl

     劑:乙酸乙酯、正己烷、乙腈

五、樣本前處理步驟

樣本處理前須知

a)實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭,吸取不同試劑時要更換吸頭。

b)實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈,必要時可對實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔,以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

樣本前處理需配制:

配液1  樣本提取液:

20X濃縮提取液用去離子水按119稀釋。(120X濃縮提取液+19份去離子水)。

配液2  牛奶樣本提取液:

將乙腈與乙酸乙酯按 1:2 比例混合均勻(1份乙腈+2 份乙酸乙酯)。

樣本處理:

a)組織 (雞肉/肝、豬肉/肝、蝦、魚等)樣本處理方法

1、 稱取均質(zhì)后的樣本1±0.05g50ml離心管中,先加入10ml樣本提取液(配液1,振蕩2min,室溫4000r/min以上離心5min;

2、 取出100µl上層液體加入400µl樣本提取液(配液1,混合均勻

3、 50 µl用于分析

樣本稀釋倍數(shù):  50

注:如需檢測范圍包含100ppb,可在上述步驟1離心后取出100µl上層液體加入900µl樣本提取液(配液1),混合均勻;取50µl用于分析。

此時,樣本稀釋倍數(shù)為:100

b)蜂蜜處理方法

1、 2±0.05 g蜂蜜,放入離心管中,用4ml去離子水溶解;加入4ml乙酸乙酯振蕩2min,室溫4000r/min以上離心10min;

2、 移取2ml上層清澈液到另一離心管中,50-60℃氮?dú)饬飨赂稍?;?/span>1ml樣本提取(配液1溶解干燥的殘留物,混合30s;

3、 50 µl用于分析。

樣本稀釋倍數(shù):  1倍  

c)牛奶樣本處理方法

1、 吸取牛奶樣本1ml5ml離心管中, 加 入2ml

牛奶樣本提取液(配液2振蕩1min,室溫  

4000r/min以上離心10min

2、 取出1ml上層液體在50-60℃氮?dú)饬髦写蹈桑?

3、 加入1 ml正己烷溶解干燥的殘留物,再加1ml

樣本提取(配液1混合30s,室溫4000r/min

以上離心5min;去除上層有機(jī)相;

4、 取50 µl下層相用于分析。

樣本稀釋倍數(shù):  2      

六、 酶標(biāo)免疫分析程序:

測定前應(yīng)須知:

1、 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫(2025℃)。

2、 使用之后立即將所有試劑放回28℃。

3、 ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的一致性,正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點(diǎn)。

4、 所有恒溫孵育過程,避免光線照射,用蓋板膜蓋住微孔板。

操作步驟:

1、 28℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑,室溫(2025)平衡30min以上,注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

2、 取出框架及需要數(shù)量的微孔,將不用的微孔放入自封袋,保存于2-8℃

3、 配液:將15ml濃縮洗滌液(20倍濃縮)用去離子水按照119稀釋(1份濃縮洗滌液+19份去離子水),或按所需用量配制洗滌液。

4、 編號:將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號,每個樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。

5、 加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品50µl/孔到各自的微孔中,加入酶標(biāo)記物50µl/孔,然后再加入抗體工作液50µl/孔,用蓋板膜封板,25℃環(huán)境中反應(yīng)30min

6、 將孔內(nèi)液體甩干,用已稀釋的洗滌液250µl/孔洗板45次,每次間隔1530秒,用吸水紙拍干(拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。

7、 顯色:加入底物A50µl/孔,再加入底物B50µl/孔,輕輕振蕩混勻,25℃環(huán)境中避光顯色15min。

8、 測定:加入終止液50µl/孔,輕輕振蕩混勻,設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處(建議用雙波長450/630nm檢測,5min內(nèi)讀數(shù)),測定每孔OD值。

七、結(jié)果判定

結(jié)果判定有兩種方法,粗略判定可用第1種方法,定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含氟苯尼考量成負(fù)相關(guān)。

1、粗略判定:

用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本1的吸光度值為0.3,樣本2的吸光度值為1.0,標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是:0ppb2.243; 0.1ppb1.8160.2ppb1.415;0.4ppb0.740.8ppb0.313;1.6ppb0.155。則樣本1的濃度范圍是0.8ppb1.6ppb;樣本2的濃度范圍是0.2ppb0.4ppb,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中氟苯尼考實(shí)際濃度。

2、定量分析

1)百分吸光率的計算,標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的吸光度值的平均值(雙孔)除以第一個標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值,再乘以100%,即

百分吸光率(%)=

B

×100%

B0

B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值

B0—0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計算

以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo),以氟苯尼考標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ng/ml)的半對數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中氟苯尼考實(shí)際濃度。

若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。

 

八、 注意事項

1、 室溫低于25℃或試劑及標(biāo)本未回到室溫(2025℃)會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。

2、 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會伴隨著標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。

3、 混合要均勻,否則會出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。

4、 反應(yīng)終止液為2M硫酸,避免接觸皮膚。

5、 不要使用過了有效日期的試劑盒;稀釋或攙雜使用會引起靈敏度、OD值變化;不要交換使用不同批號的盒中試劑。

6、 不用的微孔板放進(jìn)自封袋重新密封;標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感,因此要避免直接暴露在光線下。

7、 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。標(biāo)準(zhǔn)品1的吸光度值小于0.5時,表示試劑可能變質(zhì)。

8、 該試劑盒Z佳反應(yīng)溫度為25℃,溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

9、 組織樣本若檢測結(jié)果高于80ppb,可將樣本進(jìn)行再次稀釋后檢測,結(jié)果乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)即可。

九、儲藏條件和保質(zhì)期

1、 儲藏條件:試劑盒于2-8℃保存,不要冷凍。

2、  質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見包裝盒。

提示:酶標(biāo)板真空包裝袋若有漏氣,酶標(biāo)板仍然正常有效,不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,請放心使用。

 

實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):

 

免疫組化IHC染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

細(xì)胞、組織TUNEL凋亡染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

試劑盒免費(fèi)代檢測

實(shí)驗(yàn)室代做實(shí)驗(yàn)項目

 

透射電鏡服務(wù)實(shí)驗(yàn)服務(wù)

石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡

核仁組成區(qū)嗜銀-AGNOR染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

免疫共沉淀(CHIRP)實(shí)驗(yàn)

RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀(RIP)實(shí)驗(yàn)代做

酶聯(lián)免疫(ELISA)技術(shù)服務(wù)

雞傳染性法氏囊病病毒VP2抗體診斷試劑盒

喹諾酮類快速檢測試劑盒

組織芯片/微陣列定制技術(shù)服務(wù)

 

染色質(zhì)免疫沉淀分析(CLIP)實(shí)驗(yàn)服務(wù)

 

多因子液相芯片技術(shù)(Luminex)實(shí)驗(yàn)

免疫細(xì)胞化學(xué)ICC實(shí)驗(yàn)服務(wù)

ATP/ADP檢測實(shí)驗(yàn)服務(wù)

蛋白雙向(2-D)電泳實(shí)驗(yàn)服務(wù)

蛋白相互作用分析

堿性磷酸酶染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

PKC活性檢測實(shí)驗(yàn)

非標(biāo)定量實(shí)驗(yàn)

(Label-free)

 

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端粒酶活性檢測實(shí)驗(yàn)

細(xì)胞生長曲線的測定

掃描電鏡服務(wù)

NF-KB p65活性檢測實(shí)驗(yàn)

 

慢病毒包裝實(shí)驗(yàn)服務(wù)


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