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人磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶T172ELISA檢測(cè)試劑盒說明書
點(diǎn)擊次數(shù):747 更新時(shí)間:2021-07-08

本試劑盒只能用于科學(xué)研究,不得用于醫(yī)學(xué)診斷

人(Human)磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶T172(pAMPK-T172)ELISA檢測(cè)試劑盒使用說明書

檢測(cè)原理

試劑盒采用雙抗一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶T172(pAMPK-T172)抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶T172(pAMPK-T172)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值),計(jì)算樣品濃度。

樣品收集、處理及保存方法

1.  血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2.  血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

3.  細(xì)胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

5.  保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品

1. 酶標(biāo)儀(450nm)

2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

操作注意事項(xiàng)

1.  試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶,這屬于正?,F(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。

2.  實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。

3.  濃度為0的S0號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對(duì)照或者空白;按照說明書操作時(shí)樣本已經(jīng)稀釋5倍,最終結(jié)果乘以5才是樣本實(shí)際濃度。

4.  嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。

5.  所有液體組分使用前充分搖勻。

試劑盒組成

名稱

96孔配置

48孔配置

備注

微孔酶標(biāo)板

12孔×8條

12孔×4條

標(biāo)準(zhǔn)品

0.3mL*6管

0.3mL*6管

樣本稀釋液

6mL

3mL

檢測(cè)抗體-HRP

10mL

5mL

20×洗滌緩沖液

25mL

15mL

按說明書進(jìn)行稀釋

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

終止液

6mL

3mL

封板膜

2張

2張

說明書

1份

1份

自封袋

1個(gè)

1個(gè)

注:標(biāo)準(zhǔn)品(S0-S5)濃度依次為:0、1.25、2.5、5、10、20 ng/mL

試劑的準(zhǔn)備

 20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

洗板方法

1.  手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。

2.  自動(dòng)洗板機(jī):每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。

操作步驟

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;

3.  樣本孔先加待測(cè)樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加。 

4.  除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。

6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

結(jié)果判斷

 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線:在Excel工作表中,以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo),對(duì)應(yīng)OD值作縱坐標(biāo),繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線,按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。

 

試劑盒性能

1.  準(zhǔn)確性:標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值,大于等于0.9900。

2.  靈敏度:最DI檢測(cè)濃度小于0.5 ng/mL。

3.  特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

4.  重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

5.  貯藏:2-8℃,避光防潮保存。

6.  有效期:6個(gè)月

 

實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):

 

免疫組化IHC染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

細(xì)胞、組織TUNEL凋亡染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

試劑盒免費(fèi)代檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)室代做實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目

 

透射電鏡服務(wù)實(shí)驗(yàn)服務(wù)

石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡

核仁組成區(qū)嗜銀-AGNOR染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

免疫共沉淀(CHIRP)實(shí)驗(yàn)

RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀(RIP)實(shí)驗(yàn)代做

酶聯(lián)免疫(ELISA)技術(shù)服務(wù)

雞傳染性法氏囊病病毒VP2抗體診斷試劑盒

喹諾酮類快速檢測(cè)試劑盒

組織芯片/微陣列定制技術(shù)服務(wù)

 

染色質(zhì)免疫沉淀分析(CLIP)實(shí)驗(yàn)服務(wù)

 

多因子液相芯片技術(shù)(Luminex)實(shí)驗(yàn)

免疫細(xì)胞化學(xué)ICC實(shí)驗(yàn)服務(wù)

ATP/ADP檢測(cè)實(shí)驗(yàn)服務(wù)

蛋白雙向(2-D)電泳實(shí)驗(yàn)服務(wù)

蛋白相互作用分析

堿性磷酸酶染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

PKC活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

非標(biāo)定量實(shí)驗(yàn)

(Label-free)

 

DIGE技術(shù)實(shí)驗(yàn)服務(wù)

端粒酶活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的測(cè)定

掃描電鏡服務(wù)

NF-KB p65活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

 

慢病毒包裝實(shí)驗(yàn)服務(wù)

滬公網(wǎng)安備 31011802001676號(hào)

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