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質(zhì)粒小量快速提取常見問題及操作步驟
點(diǎn)擊次數(shù):3894 更新時間:2021-03-10

質(zhì)粒小量快速提取試劑盒

Rapid Mini Plasmid Kit

 

產(chǎn)品信息: 

試劑盒組成

保存

DP101-01

100 

DP101-02

200 

 

平衡液BL

 

室溫

 

60ml

 

120ml

RNaseA10mg/ml

室溫

300µl

300µl×2

溶液 P1

4

30ml

30ml×2

溶液 P2

室溫

30ml

30ml×2

溶液 P3

室溫

40ml

40ml×2

 

漂洗液WB

 

室溫

25ml 25ml×2

-次使用前按說明加指—*定量乙醇

洗脫緩沖液 EB

室溫

15ml

10ml×2

吸附柱AC

室溫

100 

200 

收集管(2ml

室溫

100 

200 

 

保存條件:本試劑盒在室溫儲存 18 個月不影響使用效果。

產(chǎn)品介紹:

本試劑盒采用改進(jìn) SDS-堿裂解法裂解細(xì)胞,離心吸附柱內(nèi)的硅基質(zhì)膜在高鹽、低pH 值狀

態(tài)下選擇性地

結(jié)合溶液中的質(zhì)粒DNA,再通過漂洗液將雜質(zhì)和其它細(xì)菌成分去除,后低鹽、高 pH 

的洗脫緩沖液

將純凈質(zhì)粒DNA 從硅基質(zhì)膜上洗脫。

產(chǎn)品特點(diǎn)::

1. 離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口特制吸附膜,柱與柱之間吸附量差異極小,可重復(fù)

性好。克服了國產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。

快速、方便,不需要使用有毒的苯酚、氯-*仿等試劑,也不需要乙醇沉淀。獲得的質(zhì)粒產(chǎn)量高、純度好,可以直接用于酶切、轉(zhuǎn)化、PCR、體外轉(zhuǎn)錄、測序等各種分子生物學(xué)實驗。

 

注意事項:

1.第-次使用時,將試劑盒所帶的全部 RNase A 加入溶液 P1 終濃度 100ug/ml  2-8℃保存。如果溶液 P1  RNase A 失活,提取的質(zhì)??赡軙形⒘?/font> RNA 殘留, 在溶液 P1 中補(bǔ)加 RNase 即可。

2.環(huán)境溫度低時溶液 P2  SDS 可能會析出渾濁或者沉淀,可在 37℃水浴加熱幾分鐘, 即可恢復(fù)澄清,不要劇烈搖晃,以免形成過量的泡沫。

3.避免試劑長時間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、pH 值變化。

4.本試劑盒適用菌株為 XL-1 Blue  DH5a 等核酸酶含量低缺陷型菌株。所用菌株為JM 系列、HB101  endA 菌株或野生型菌株,核酸酶含量豐富,應(yīng)購買本公司生產(chǎn)的高純度質(zhì)粒小量快速提取試劑盒。

5.溶液 P3 中含有刺激性化合物,操作時要戴乳膠手套,避免沾染皮膚、眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時,要用大量清水或者生理鹽水沖洗。提取質(zhì)粒的量與細(xì)菌培養(yǎng)濃度、質(zhì)??截悢?shù)等因素有關(guān)。一般高拷貝質(zhì)粒,建議接種單菌落于 1.5-4.5ml 加合適抗生素的 LB 培養(yǎng)基,過夜培養(yǎng) 14-16 個小時,可提取出多達(dá) 20µg 的純凈質(zhì)粒。如果所提質(zhì)粒為低拷貝質(zhì)粒或大于 10kb 的大質(zhì)粒,應(yīng)適當(dāng)加大菌體使用量,使用 5-10ml 夜培養(yǎng)物,同時按比例增加 P1、P2、P3 的用量,其它步驟相同。

6.得到的質(zhì)粒 DNA 可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。OD260  1 相當(dāng)于大約 50μg/ml DNA。電泳可能為單一條帶,也可能為 2 條或者多條 DNA 條帶,這主要是不同程度的超螺旋構(gòu)象質(zhì)粒泳動位置不一造成,與提取物培養(yǎng)時間長短、提取時操作劇烈程度等有關(guān)。本公司產(chǎn)品正常操作情況下基本超螺旋可以超 90%。

7. 洗脫液 EB 不含有螯合劑 EDTA,不影響下游酶切、連接等反應(yīng)。也可以使用水洗脫, 但應(yīng)該確保 pH 大于 7.5pH 過低影響洗脫效率。用水洗脫質(zhì)粒應(yīng)該保存在-20℃。質(zhì)粒DNA 如果需要長期保存,可以用 TE 緩沖液洗脫10mM Tris-HCl,1mM EDTA, pH 8.0,但是 EDTA 可能影響下游酶切反應(yīng),使用時可以適當(dāng)稀釋。

 

備試劑無水乙醇

 

操作步驟:

提示:

ð 第--次使用前請先在漂洗液 WB 中加入指-*定量無水乙醇,充分混勻,加入后請及時在

方框打鉤標(biāo)記已加入乙醇,以免多次加入!

ð  RNase A 全部加入溶液 P1 中,混勻,每次使用后置于 2-8℃保存。

 ð 將溶液 P3 放在冰上預(yù)冷,可以提高產(chǎn)量。

1. 向吸附柱 A(吸附柱放入收集管中 500μl 的平衡液 BL12,000pm  離心 1 min,倒掉

收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。

2.  1.5-4.5ml 過夜培養(yǎng)的菌液 12,000rpm 離心 30 sec,盡可能的倒干上清,收集菌體。

3.  250μl 溶液 P1 重懸菌體沉淀,渦旋振蕩至*懸浮。

4.  250μl 的溶液 P2,溫和地上下翻轉(zhuǎn) 4 -7 次使菌體充分裂解。

5.  350μl 溶液 P3,立即溫和地上下翻轉(zhuǎn) 4-7 次,充分混勻時會出現(xiàn)白色絮狀沉淀,

12,000rpm 離心 5 min,小心取上清。

6. 將上一步所得上清加入吸附柱 A吸附柱放入收集管中12,000rpm 離心30-60 sec,

倒掉收集管中的廢液。

 

7. 加入 500μl 漂洗液 WB請先檢查是否已加入無水乙醇!,12,000rpm  離心 30 sec,棄

掉廢液。

 

8. 重復(fù)步驟 7。

9. 將吸附柱 AC 放回空收集管中,12,000rpm 離心 2 min,將吸附柱置于室溫放置數(shù)分鐘,

以*晾干吸附材料中殘余的漂洗液,  以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。10.取出吸附

 AC,放入一個干凈的離心管中,室溫放置 10 min

 

11.在吸附膜的中間部位加 50μl-100μl 洗脫緩沖液 EB洗脫緩沖液事先在 65-70℃水浴中加熱

效果更好,室溫放置 2 min,12,000rpm  離心 1 min。如果需要較多量質(zhì)粒,可將得到的溶液

重新加入離心吸附柱中,離心1 min。洗脫體積越大,洗脫效率越高。果需要質(zhì)粒濃度較

高,可以適當(dāng)減少洗脫體積, 但是小體積不應(yīng)少于 30μl,體積過小降低質(zhì)粒洗脫效

率,減少質(zhì)粒產(chǎn)量。洗脫液的 pH 值對于洗脫效率有很大影響。

 

實驗代做服務(wù):

 

免疫組化IHC染色實驗服務(wù)

細(xì)胞、組織TUNEL凋亡染色實驗服務(wù)

試劑盒免費(fèi)代檢測

實驗室代做實驗項目

 

透射電鏡服務(wù)實驗服務(wù)

石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡

核仁組成區(qū)嗜銀-AGNOR染色實驗服務(wù)

免疫共沉淀(CHIRP)實驗

RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀(RIP)實驗代做

酶聯(lián)免疫(ELISA)技術(shù)服務(wù)

雞傳染性法氏囊病病毒VP2抗體診斷試劑盒

喹諾酮類快速檢測試劑盒

組織芯片/微陣列定制技術(shù)服務(wù)

 

染色質(zhì)免疫沉淀分析(CLIP)實驗服務(wù)

 

多因子液相芯片技術(shù)(Luminex)實驗

免疫細(xì)胞化學(xué)ICC實驗服務(wù)

ATP/ADP檢測實驗服務(wù)

蛋白雙向(2-D)電泳實驗服務(wù)

蛋白相互作用分析

堿性磷酸酶染色實驗服務(wù)

PKC活性檢測實驗

非標(biāo)定量實驗

(Label-free)

 

DIGE技術(shù)實驗服務(wù)

端粒酶活性檢測實驗

細(xì)胞生長曲線的測定

掃描電鏡服務(wù)

NF-KB p65活性檢測實驗

 

慢病毒包裝實驗服務(wù)

滬公網(wǎng)安備 31011802001676號

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