Tricine-SDS-PAGE凝膠制備試劑盒說明書

Tricine-SDS-PAGE Gel Kit

Tricine-SDS-PAGE凝膠制備試劑盒

目錄號：K2384

組分說明及保存條件

           Cat. No.          K2384

                                            保存條件

           Size             約 50塊膠

         49.5%T 3%C         30 ml               2-8ºC

         49.5%T 6%C         100 ml               2-8ºC

         凝膠緩沖液           140 ml               2-8ºC

         甘油                30 ml               室溫

         APS                0.5 g                室溫

         TEMED               750 ul           室溫，避光

本產(chǎn)品所提供的 APS（過硫酸銨）為固體粉末，使用前加入雙蒸水溶解即配制成10%APS溶液（0.5 g  APS加5 ml雙蒸水），將溶液分裝后置于-20℃保存，通常半年內(nèi)有效。溶液在使用中可放置4℃保存兩周。

本產(chǎn)品僅供科研使用，請勿用于臨床診斷及其他用途  

產(chǎn)品簡介

　　常規(guī)的Tris-SDS-PAGE電泳的只能分辨大分子蛋白，對于相對分子量小的，尤其

是10 kD以下的蛋白分辨率極低。而Tricine-SDS-PAGE可以很好的分離分子量在1-10 kD

的蛋白及多肽，成為目前電泳法變性分離多肽的主要方法。本產(chǎn)品包括Tricine-SDS-

PAGE凝膠制備所需全套試劑，只需自備蒸餾水，即可制備高質(zhì)量各種濃度的凝膠，方

便、快捷，電泳后可直接用于考染、銀染、Western雜交等實(shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng)

1.  10%APS配制后分裝-20度保存。APS溶液不穩(wěn)定，應(yīng)盡量減少室溫存放時間，每

次取用后立即放回冰箱，以防失效；若發(fā)現(xiàn)凝膠聚合時間延長，應(yīng)考慮更換，使用

-20度保存的10%APS。

2.在凝膠配制過程中，尤其是液體混勻步驟，應(yīng)盡量避免氣泡的產(chǎn)生。

3.在分離膠上層加蒸餾水時要小心操作，加水時速度不能太快。

4.丙烯酰胺具有神經(jīng)毒性，操作時請穿著實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套。

5.本產(chǎn)品僅用于科研，不能用于人體實(shí)驗(yàn)或人體治療。

操作步驟

根據(jù)目的蛋白分子量大小選擇合適的PAGE分離膠配制濃度，凝膠濃度配方參考附表。

 I 配制分離膠

1．將不同體積的雙蒸水、49.5%T 6%C、凝膠緩沖液和甘油加入到離心管中混合。

2．加入10%APS和TEMED，立即渦旋混勻5-10秒，以使溶液充分混勻。

3．在凝膠模具中迅速灌入適量分離膠溶液（1 mm mini-gel，分離膠溶液加約4 ml），

   然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1-3  cm的水層，使凝膠表面保持平整。

4．靜置，待分離膠和水層之間出現(xiàn)一個清晰的界面表示凝膠已聚合。

 II 配制夾層膠

  去除覆蓋在分離膠上的水層，用濾紙將殘留的水盡量吸去。

1．將不同體積的雙蒸水、49.5%T 3%C和凝膠緩沖液加入到離心管中混合。

2．加入10%過硫酸銨和TEMED，立即渦旋混勻5-10秒，以使溶液充分混勻。

3．將適量的夾層膠溶液迅速加至分離膠的上面（對于1 mm的mini-gel，夾層膠溶液加

   約1 ml ），然后在夾層膠溶液上輕輕覆蓋一層水層，使凝膠表面保持平整。

4．靜置，待夾層膠和水層之間出現(xiàn)一個清晰的界面表示凝膠已聚合。

III 配制濃縮膠

去除覆蓋在夾層膠上的水層，用濾紙將殘留的水吸去。

    1．將不同體積的雙蒸水、49.5%T 3%C和凝膠緩沖液加入到離心管中混合。

    2．加入10%過硫酸銨和TEMED，立即渦旋混勻5-10秒，以使溶液充分混勻。

    3．將梳子插入凝膠內(nèi)，避免產(chǎn)生氣泡。

    4．待凝膠聚合后，小心地拔出梳子，以免破壞加樣孔。

    5．進(jìn)行電泳操作。

IV 電泳

將電泳槽放入4℃或冰水浴中，外槽加入陽極緩沖液（K2388），內(nèi)槽加入陰極緩沖液（K2387），30V預(yù)電泳10 min，將樣品（已經(jīng)過Tricine上樣緩沖液YJ2385處理）加入點(diǎn)樣孔后30V電泳1小時，100V電泳至溴酚藍(lán)到達(dá)膠底部后停止電泳，進(jìn)行后續(xù)的考馬斯亮藍(lán)染色或電轉(zhuǎn)。

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